EB的危害及其实验室安全使用预防措施

来源：http://www.ehs.berkeley.edu/    

翻译：孙明顺 校对：何淑芳（上海生命科学研究院生化细胞所分子生物学技术平台）

 在电泳实验或其他核酸分离实验中，常用EB（Ethidium bromide，EtBr）作非放射性的Marker，来识别和显示核酸条带。EB是一种深红色不易挥发的晶体，微溶于水。当被紫外线照射时能发出红褐色的荧光。尽管EB是一种高效的显色剂，但它的高危险性要求特殊的安全管理和回收流程。

人体危害  EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。

安全预防措施 良好的操作习惯可以降低危害接触。

在通风厨使用粉状或结晶EB时，或使用含EB的溶液或片剂时，为避免吸入EB，应避免与EB的直接接触。

为避免皮肤接触到溶液中的EB，应戴手套、实验服和防护镜，并勤换手套。

要告知ＥＢ使用者ＥＢ的危险性、正确使用及回收方法。此外，经培训的才能通过实验室化学卫生管理计划，获得ＣＨＰ（the laboratory’s Chemical Hygiene Plan）的证书。拥有该证书者才算是按标准操作使用ＥＢ。

在使用含ＥＢ类材料前需制订一份ＥＢ安全使用说明。

进入工作区域需佩戴防护镜并确认有可使用的洗眼及淋浴设施。

和其他化学药品一样，在ＥＢ的使用及放置房间内不准饮食。

使用后脱去手套及时洗手，彻底处理掉残留的ＥＢ。

在使用ＵＶ照射ＥＢ时，戴上紫外线防护镜或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽。

紧急处理措施

误入眼睛措施：如果ＥＢ不慎落入眼睛，立即用大量的冷水冲洗至少１５分钟。最好能用洗眼药水进行擦洗。

误接触措施：如果皮肤不慎接触到ＥＢ，立即脱去被污染的衣物。再用肥皂清洗接触到的皮肤后，大量的冷水冲洗至少１５分钟。

误服措施：如果不慎误服或吸入ＥＢ，将受害者移至通风处，并及时送医救治。

泄漏污染处理：如果EB不慎洒落在水槽或者下水道，请立刻告知相关管理部门。如果大量EB洒落，应立即通知在该工作域的所有人员，将人员疏散并开始清理被污染的区域。在未清理好现场的同时，应竖牌警告他人勿入。并为有关部门提供资料及协作。

若仅微量ＥＢ排入下水道并被及时发现，在确保安全的情况下可由实验室熟知EB危害的人员进行清理。当然，清理EB的人员是必须经过安全培训，并有防范意识和相应的处理装置。如果实验室的人员未经培训或没有处理装置，请联系相关部门进行处理。

净化处理：在清理微量洒落的ＥＢ时，需全程穿着防护服（按上文所描述的“安全预防措施”）。用紫外灯照射确定污染的位置。ＥＢ的荧光是很容易看到的。如果洒落的EB是粉末状，用湿纸巾擦拭后并按程序清理。如果洒落的是液体，用干纸巾吸干后再用UV光检查残余的ＥＢ，然后按程序清理。

当准备或使用除污剂时配戴全面防护装备（实验服、手套和防护镜）。在用ＥB前，需预先准备好除污剂：4.2克亚硝酸钠（NaNO2, CAS # 7362-00-0）和20毫升的次磷酸（50％） （H3PO2, CAS # 6303-21-5），加入300毫升水。

１）用纸巾蘸取去污剂擦洗被污染的区域，再用纸巾加自来水清洗5次，每次实用的纸巾都必须是干净未污染的。

２）用紫外光检查已清洗的区域，以确保所有ＥＢ被清除。必要时可重复步骤１。如果酸可能损害被污染的表面，可用适量自来水稀释去污剂后再使用。

３）将所有使用过的纸巾用去污剂浸泡1小时，取出并将附着的去污剂拧干收回容器内。被处理时使用的手套和其他物件可双层包裹再扔弃。

４）在去污剂的容器上标上EB去污剂，并注明成分。将去污使用过的物件打包，后续处理程序如下。

¹ Lunn, G. & Sansone, E.B., Destruction of Hazardous Chemicals in the Laboratory, John Wiley & Sons, New York, 1990, p. 119-120.

在下表中明确了各类含EB废液的处理方法。从管道排放EB溶液前，先用紫外灯照射是否还有荧光。如果仍有荧光，那该溶液仍需处理后才能从管道中排放。

1）过滤，用木炭颗粒过滤器或ＥＢ回收器。类似处理的装置有Schleicher & Schuell 的EB回收系统，以及EMD Biosciences的EB吸附器，这两样可在VWR公司购买到。或可适用Fluka的EB/SYBR^®Green 清除剂，或Sigma的EB回收器，这两个可在Sigma-Aldrich公司购买到。注意该产品的指示，不要超过回收器的能力。一旦超过它们的使用限度，过滤器或提取器必须经生物安全处理后抛弃

2）吸收，现已有专门去除EB的“茶包”式产品，专门设计用于ＥＢ去污，如Qbiogene的GreenBag™ EB废弃处理套件和Amresco的脱色袋。按照产品指示，确保有足够的茶包吸收溶液中大量的ＥＢ。一旦已经用尽，“茶包”必须经相应部门安全处理后抛弃。

抛弃处理  将实验室处理废弃EB的方法和程序记录下来，并整合到实验室的标准作业程序中。关于不同类型的EB物品的处理方法，请参阅下表。

　　　　　　　　　　　　　　　　废弃ＥＢ处理指南

有效处理后的废液，再确保检测不到EB后方可排入下水道{核实荧光}。

处理EB的其他方法 可改用低毒性的其他材料来替代ＥＢ（ 例如，可用SYBR Safe^TM 对DNA凝胶染色），以减少在实验室里可能发生的危险。处置ＥＢ的替代品也需有相应部门决定其处理方法后再做废弃处理。如有任何疑问，请联系该部门。